高效能mRNA標記檢測技術平台簡介

2018/3/1
高效能mRNA標記檢測技術平台簡介

 

高效能mRNA標記檢測技術平台簡介

 

這個技術平台,主要可以分成四大技術面:1.檢體處理 2.生物素標定 3.寡核甘酸晶片製備 4.mRNA偵測反應,操作流程如下所述:

  檢體處理:我們主要的檢體來源為血液檢體,每次檢測的血液檢體量只需0.5 mL即可進行檢測;透過試劑萃取,將血液中的細胞溶解,並利用帶正電荷之磁珠,進行核醣核酸(RNA)吸附萃取,且將去氧核醣核酸(DNA)及其他雜質移除,將血液轉變成高純度RNA檢體。

  生物素標定:將萃取好的RNA檢體,利用反轉錄酵素酶和生物素(biotin),合成含有生物素之cDNA;重複此步驟一次,確保所有RNA均轉換成cDNA,以便進行mRNA偵測之雜合反應。

  寡核甘酸晶片製備:首先先篩選mRNA特異型寡核苷酸片段,利用點漬之技術,將這些片段點漬製PP膜上,最後用UV加以固定在PP膜,此寡核甘酸晶片則製備完成。

  mRNA偵測反應:將合成好的cDNA與寡核甘酸晶片進行兩次之雜合反應,接著加入strep-avidin反應,最後利用NBT/BCIT進行呈色。晶片烘乾後,進行晶片基因之計算分析。

 

 優點 

  • 高準確性

        此技術平台與即時定量聚合酶鏈鎖反應(Q-PCR)呈現高度一致性。(可見下圖)

       

  • 高效率

         可同時分析多個基因群的基因變化。

  • 高應用性

        舉凡需探究基因變化之臨床疾病或基礎研究相關領域,皆可採用作為核心技術。

 

參考文獻
1. Hsiung SK, Chang HJ, Yang MJ, Chang MS, Tsao DA, Chiu HH, Chen YF, Cheng TL, Lin SR: A novel technique for detecting the therapeutic target, KRASmutant, from peripheralblood using the automatic chipball device with weighted enzymatic chip array. Fooyin J Health Sci 2009, 1(2):72-80.
2. Hsiung SK, Lin SR, Chang HJ, Chen YF, Huang MY: Clinical application of automatic gene chip analyzer (WEnCA-Chipball) for mutant KRAS detection in peripheral circulating tumor cells of cancer patients.Biomedical Engineering Trends, Research and Technologies 2011.
3. Huang MY, Wang HM, Tok TS, Chang HJ, Chang MS, Cheng TL, Wang JY, Lin SR: EVI2B, ATP2A2, S100B, TM4SF3 and OLFM4 as potential prognostic markers for postoperative Taiwanese colorectal cancer patients. DNA Cell Biol 2012, 31(4):625-635.